文章要點(diǎn)：上海樂(lè )楓市場(chǎng)部對目前疫情防控工作中的熒光定量PCR的核酸檢測技術(shù)做了深入淺出地闡述，并為該實(shí)驗中使用的純水設備做了解析和介紹。

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目前疫情的防控工作取得了階段性的成效，基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的核酸檢測技術(shù)在新冠病毒快速鑒定及確診中發(fā)揮了重要作用。
 

什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR？
 

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技術(shù)，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR,是在PCR反應體系中加入熒光物質(zhì)（熒光染料或熒光標記的特異性探針），利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 

與普通PCR相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍。運用該項技術(shù)，可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行相對定量、定量和定性分析。

實(shí)驗流程：

在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗中，可以分為樣本采集，RNA提取，RNA質(zhì)量鑒定，反轉錄及數據分析幾個(gè)步驟，在進(jìn)行引物、模板的稀釋?zhuān)噭┑呐渲坪脱a足反應體系時(shí)都會(huì )用到水，水質(zhì)量的好壞直接影響終數據分析的結果。
 

水中的顆粒物，離子含量，有機物及細菌微生物等雜質(zhì)對實(shí)驗都會(huì )帶來(lái)影響，zui值得關(guān)注的因素有以下兩個(gè)方面：
 

1. DNA酶和RNA酶

DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR時(shí)，去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關(guān)鍵。尤其在提取RNA的時(shí)候，RNA極易被降解。這是因為RNase非常穩定，且無(wú)處不在，用常規的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase*失活。如果樣本中的核酸被降解，會(huì )影響檢測結果的準確性，甚至造成假陰性檢測結果。

因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量，減少對實(shí)驗的影響。
 

2. 鎂離子

實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗需要根據不同的引物對和模板確定zuijia的鎂離子濃度。

Mg2+濃度過(guò)低，會(huì )影響DNA聚合酶的活性，導致產(chǎn)量降低，影響實(shí)時(shí)定量的敏感性；

Mg2+濃度過(guò)高，會(huì )增加引物二聚體的形成，這會(huì )影響特異性。

因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗用超純水必須控制Mg2+濃度，避免背景因素帶來(lái)的不確定性。

綜上，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗推薦使用超純水，水質(zhì)要求如下圖所示：
 

純水儀器選型推薦：
 

根據上述的分析和用水指標，可以采用樂(lè )楓的Genie G一體超純水機和Genie PURIST超純水機，這兩種純水設備都可以滿(mǎn)足實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應的用水要求。
 

南科大安裝的 Genie G
 

GenieG和Genie PURIST純水設備是上海樂(lè )楓RephiLe為e 時(shí)代的實(shí)驗室純水需求開(kāi)發(fā)的智能型實(shí)驗室純水系統。
采用了無(wú)線(xiàn)技術(shù)，主機、主控屏和手柄之間采用無(wú)線(xiàn)連接，按需隨意放置。
耗材/ 零部件實(shí)現了可全程追溯，quan方位監控的要求，防水的控制屏可帶手套操作。
Genie純水儀設計緊湊，體積小，可掛墻，可置于臺盆下，方便用戶(hù)合理利用空間。

其中，GenieG采用了EDI模塊，可從自來(lái)水制備超純水和EDI純水，為實(shí)驗不同需要帶來(lái)方便。Genie PURIST則是從純水制備超純水的一款儀器，安裝使用非常方便。

該兩款設備還有兩個(gè)很重要的優(yōu)勢可以適用于qPCR實(shí)驗：

? Genie系列超純水機，可以配置樂(lè )楓RephiLe配方填料的低鎂型純化柱，不但可以廣譜去除水中的金屬離子，還可以特異性去除水中的鎂離子，保證超純水中Mg2+對qPCR實(shí)驗零干擾。這種低鎂型純化柱是樂(lè )楓dujia提供，專(zhuān)為PCR和測序實(shí)驗研究開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品。

? 裝有帶電荷尼龍膜的RephiBio終端濾器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶，避免核酸酶對實(shí)驗的影響。

配備了低鎂型純化柱和RephiBio，GenieG和GeniePURIST可以為你的熒光定量PCR反應保駕護航。

中科大安裝的 Genie PURIST
 

Genie系列純水機水質(zhì)穩定，品質(zhì)高，而且有數據保證：水質(zhì)已經(jīng)通過(guò)第三方省級以上檢測機構的檢測；RephiBio終端過(guò)濾器，也具有國外實(shí)驗室熱源、DNase和RNase的檢測報告。使用Genie系列超純水機，可以確保超純水對qPCR反應的不確定性降至低，讓用戶(hù)“用水無(wú)憂(yōu)”，享受的體驗。

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上海樂(lè )楓生物科技有限公司

上海樂(lè )楓(Rephile Bioscience，Ltd.) 是一家專(zhuān)業(yè)從事水純化和實(shí)驗室分離純化產(chǎn)品研發(fā)、設計和制造的企業(yè)，為高科技生物技術(shù)和生命科學(xué)領(lǐng)域的用戶(hù)服務(wù)。樂(lè )楓公司著(zhù)眼于發(fā)展，在中國、美國、法國、印度、南非等近20個(gè)國家建立了銷(xiāo)售機構，同時(shí)也為大型公司提供OEM和ODM，產(chǎn)品銷(xiāo)往包括歐美的近100個(gè)國家。成立十余年，樂(lè )楓持續投入研發(fā)，創(chuàng )立出了自己的產(chǎn)品品牌RephiLe（瑞楓），推出了多個(gè)新概念產(chǎn)品- 無(wú)線(xiàn)連接的Genie系列純水系統和智能型大流量純水工作站Super-Genie等。目前樂(lè )楓純化柱填料配方齊全，也提供多款密理博純水系統的兼容耗材。

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